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        蛋白质制备过程中如何保持蛋白活性?

        作者:Jade来源:聚能生物 浏览次数: 日期:2009年12月15日 16:06

        摘要:

         

        (已经被浏览762次)

         蛋白质的制备是一项十分细致的工作。涉及物理学、化学和生物学的知识很广。高分子蛋白质具有一定的立体构象,相当不稳定,极易变性、变构,为得到天然状态的蛋白质,尽量采用温和的手段,如中性、低温、避免起泡等,还要注意防腐。

         动物材料中的蛋白质有些可溶的形式存在于体液(如血浆、消化硫等)中,可以不必经过提取直接进行分离。蛋白质中的角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质,只需要适当的溶剂洗去可溶性的伴随物,如脂类、糖类以及其他可溶性蛋白质,最后剩下的就是不溶性蛋白质。这些蛋白质经细胞破碎后,用水、稀盐酸及缓冲液等适当溶剂,将蛋白质溶解出来,再用离心法除去不溶物,即得粗提取液。

         整个制备过程一般可分为5 个阶段:①材料的选择和预处理,②细胞的破碎(有时需进行细胞器的分离),③提取,④纯化(包括盐析,有机溶剂沉淀,有机溶剂提取、吸附、层析、超离心及结晶等),⑤浓缩、干燥及保存。以上5 个阶段不是要求每个方案都完整地具备,也不是每一阶段截然分开。

         不论是哪一阶段使用哪一种方法,均必须在操作中保持生物大分子结构的完整性。保存活性,防止变性及降解现象的发生。因空间结构主要依靠氢键、盐键和范德华力的存在,遇酸、遇碱、高温、剧烈的机械作用及强烈的辐射等均可导致活性丧失。(以上资料来自中国生命科学论坛)

         细胞破碎方法有多种,比如机械法(如组织捣碎匀浆机、玻璃匀浆器)、物理法(反复冻融法、冷热交替法、超声波法、高压破碎),化学及生物化学法(加入有机溶剂、溶解酶或裂解酶、表面活性剂)等。

        组织捣碎匀浆机


        玻璃匀浆器

         高压细胞破碎法是一种物理破碎方法,避免了化学法和酶法等导致的化学物残留和污染等问题。超声破碎法可能出现的起泡现象在高压破碎时是不会出现的。

         样品经适当预处理,再配合使用低温超高压连续流细胞破碎仪,提取到的蛋白质活性好。(参考文献:氯氟氰菊酯对德国小蠊保护酶活性的影响,中国媒介生物学及控制杂志,2009,20(4):303-306)。这是因为在细胞破碎过程中,低温超高压连续流细胞破碎仪提供周密的保护,最大限度地保持蛋白质活性,具体表现在:

        ① 独创的冲洗系统及进口镜面抛光316L不锈钢管道,防止样品残留,保证管道清洁,排除酸碱干扰。
        316L不锈钢管道

        ② 进样、破碎、出样全过程可在4~6℃低温循环水浴中进行,避免高温导致的蛋白质失活。
        破碎机主体浸泡在低温循环水浴中

        ③ 破碎压力0~207Mpa连续可调,便于摸索最佳破碎条件,保证温和破碎。

        所属类别: 公司新闻

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