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        微量高压细胞破碎机

        浏览次数: 日期:2009年6月4日 14:28

        摘要:

        蛋白质在大肠杆菌中高水平的表达,常常导致形成相差显微镜下可见的细胞质颗粒或包涵体。不单是外源真核蛋白在大肠杆菌中表达时会遇到这种情况,大肠杆菌自身可溶的蛋白过量表达时也会出现包涵体的情况。包涵体产生一般认为是蛋白的不正确折叠造成的。

         JNBIO(聚能生物) 的JN-3000 PLUS微量高压细胞破碎机,破碎大肠杆菌效果显著,在处理包涵体方面具有相当的经验。

         关于包涵体的处理一般包括这么几步:菌体的破碎(裂解)、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化。下面重点介绍一下菌体的破碎。

        一、菌体的裂解可以采用高速组织捣碎:此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。
        二、玻璃匀浆器匀浆:此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高,适用于量少和动物脏器组织。
        三、超声波处理法:用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂。此法多适用于微生物材料,用大肠杆菌制备各种酶。此法的缺点是在处理过程会产生大量的热。对超声波及热敏感的蛋白和核酸应慎用。
        四、反复冻融法:将细胞在-20℃以下冰冻,室温融解,反复几次,由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎。
        五、化学处理法:有些动物细胞,例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠(SDS),去氧胆酸钠等破坏细胞膜。细菌细胞壁较厚,可采用溶菌酶处理。
        六、高压细胞破碎:利用超高压能量使样品通过狭缝瞬间释放,在剪切效应、空穴效应和碰撞效应的作用下使细胞破碎。

         接下来我们来分享一个案例,和大家共同探讨一下。


        1.超声波破碎
        温度:冰浴。破碎功率:380Hz。 破碎时间:2秒╳60次

        2.高压匀浆,使用JNBIO(聚能生物)的微量高压细胞破碎机
        温度:3℃,破碎压强:140Mpa 和 170Mpa 。

        3.从图中可看出,超声波破碎和高压匀浆破碎的沉淀对比,高压匀浆破碎比超声破碎干净,杂带更少。说明高压匀浆比超声波破碎得更好,破碎率更高.高压匀浆170Mpa比140Mpa的杂带少, 且破碎的量更多,经过尿素等处理后,去掉了非常多的杂带,对后续的实验特别是纯化提供了很好的条件。

        以上数据和图片由广州聚能生物提供,真诚欢迎大家参与讨论。我们的邮箱:info@jnbio.cn.

        联系电话:13902224159,020-83544839.

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